· polyacrylamitgel phải bằng monome acrylamide, vật liệu ban đầu trùng hợp, chất xúc tác và quyền của hỗn hợp muối và đệm với nhau.
· acrylamidvà BIS (N,N'-methylene double acrylamide) là chất nền gel dạng monome.
· Ammonium Persulfate bắt đầu quá trình trùng hợp kết dính.Công thức của keo yêu cầu dung dịch amoni persulfate 10% được pha trong nước.Hầu hết các thông tin đều chỉ ra nhu cầu sử dụng tích cực.Tuy nhiên, dung dịch 10% có thể được đặt ở 4oC trong vài tuần mà hoạt tính không bị giảm đáng kể.Thêm đến 10 ml và loại bỏ khi keo không đông lại.
Lời khuyên: Tỷ lệ phần trăm củaacrylamidtrong giải trình tự keo và keo protein không giống nhau.Nếu sử dụng dung dịch acrylamide: BIS làm sẵn, hãy đảm bảo lấy đúng chai.
· TEMED (N,N,N', N'- tetramethyl ethylenediamine) là chất xúc tác, đựng trong chai màu nâu, để trong tủ lạnh.Thêm ngay trước khi đổ keo.
· Thủy tinh dùng trong điện di polyacrylamide phải được rửa sạch trước và sau mỗi lần điện.Sau khi điện di, rửa bằng bàn chải mềm và vải trong nước xà phòng nóng, rửa sạch bằng nước cất và để khô.
· Độ ẩm và bụi có thể gây ra với polyme rỗng.Trước khi điện di, làm sạch tấm kính bằng nước lau kính và lau bằng bàn chải mềm.Rửa bằng nước cất và lau khô hoàn toàn bằng khăn giấy.Rửa bằng ethanol 70% trước khi lau bằng giấy giúp làm sạch và nhanh khô.Thêm lần lượt các mẫu acrylamide: BIS, nước, dung dịch đệm, amoni persulfate, TEMED.Lắc đều và đổ ngay.
Không cần thiết phải khử khí polyacrylamide trước khi trùng hợp.(Acrylamide từng được đặt trong chân không để loại bỏ bong bóng vì oxy ức chế quá trình trùng hợp.)
Lời khuyên mẫu điểm keo ngang.
· Đặt một mảnh giấy đen vào hộp dưới cùng, nền đen để tạo một số lỗ mẫu để nhìn rõ hơn.
· Bể keo chứa đầy đệm, vừa trên lớp keo.
· Nếu cạnh có đèn thì bật đèn lên, để ánh sáng chiếu vào keo.Hút mẫu vào pipet.
· sử dụng thiết bị pipet tự động.
· Trong 10-200 mu 1 điểm chuyển động chất lỏng có thể được sử dụng ở hầu hết các điểm trên mẫu.Đối với các lỗ mẫu rất nhỏ (dưới 10μ1), đầu pipet dài dùng để dán keo giải trình tự sẽ thuận tiện hơn.
· Pipet vừa nhúng vào mẫu, hít chất lỏng chuyển động chậm.Mẫu có thể bị dính với glycerin và việc bơm nhanh có thể hút bọt khí vào đầu pipet.
· Mẫu sau khi hít đầu pipet, sẽ di chuyển đầu chất lỏng nhẹ nhàng trên mép ống hoặc giấy lau hút đầu chất lỏng ra ngoài giọt nước.Cẩn thận không hút mẫu.
Đặt mẫu vào lỗ mẫu
· Thiết bị pipet để giữ áp suất nhỏ, làm cho mẫu dịch chuyển nhẹ đầu chất lỏng tràn.
· Đầu pipet được đưa vào đệm, cao hơn một chút so với các lỗ tại chỗ, duy trì áp suất dương.Đầu pipet có thể được đưa vào một lỗ nhỏ.
· Lấy mẫu ra từ từ và đều đặn.Đầu pipet được đặt phía trên lỗ lấy mẫu điểm và mẫu sẽ chìm vào lỗ.Để mẫu chìm xuống lấp đầy lỗ mẫu thay vì ấn vào.
· Khi giọt mẫu cuối cùng có đầu chất lỏng, chất lỏng sẽ di chuyển sang chân thứ hai, từ từ nâng chất lỏng di chuyển lên, di chuyển ra khỏi vùng đệm
Làm thế nào để lấy mẫu keo dọc?
· Lỗ mẫu điểm keo dọc được hình thành giữa hai mảnh kính.Với lớp keo rất mỏng, đầu pipet thậm chí không thể lọt vào giữa hai tấm kính.Hãy cẩn thận với glycerin!Đặt đầu pipet qua lỗ mẫu và mẫu sẽ chìm vào lỗ.
· Điểm mẫu trước, hãy chắc chắn để đặt điểm thẳng đứng của lỗ mẫu gel polypropylen acyl được rửa sạch.Rửa sạch acrylamide không polyme hóa và nước có thể xuất hiện ở đáy lỗ lấy mẫu.Nước có thể làm cho lỗ mẫu nhỏ hơn đáng kể.Sử dụng ống tiêm 25ml hoặc 50ml và kim tiêm cỡ 18.Đổ dung dịch đệm điện di vào và cẩn thận xả sạch lỗ mẫu.
· Có thể khó nhìn thấy lỗ mẫu nhưng đồng thời, phần còn lại rất dễ dàng.Nếu có lỗ thừa, đệm mẫu có thể được kiểm tra bằng dung dịch xanh bromophenol.
Thời gian đăng: 31-03-2023