· polyacrylamidGel phải có monome acrylamide, vật liệu bắt đầu trùng hợp, chất xúc tác và muối cùng với hỗn hợp đệm.
· acrylamidvà BIS (N, N'- methylene double acrylamide) là dạng ma trận gel dạng monome.
· amoni persulfat bắt đầu quá trình trùng hợp keo dán. Công thức của keo đòi hỏi dung dịch amoni persulfat 10% được pha trong nước. Hầu hết các thông tin chỉ ra nhu cầu sử dụng tích cực. Tuy nhiên, dung dịch 10% có thể được đặt ở 4℃ trong vài tuần mà không mất hoạt tính đáng kể. Làm đến 10 ml và loại bỏ khi keo không kết tụ.
Mẹo: Phần trăm củaacrylamidtrong keo nối và keo protein không giống nhau. Nếu sử dụng dung dịch acrylamide: BIS pha sẵn, hãy đảm bảo lấy đúng chai.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) là chất xúc tác, đựng trong chai màu nâu, để trong tủ lạnh. Thêm ngay trước khi đổ keo.
· Thủy tinh dùng trong điện di polyacrylamide phải được rửa sạch trước và sau mỗi lần điện di. Sau khi điện di, rửa sạch bằng bàn chải mềm và vải trong nước xà phòng nóng, rửa sạch bằng nước cất và để khô.
· Độ ẩm và bụi có thể gây ra với polyme rỗng. Trước khi điện di, hãy làm sạch tấm kính bằng chất tẩy rửa kính và lau bằng bàn chải mềm. Rửa bằng nước cất và lau khô hoàn toàn bằng khăn giấy. Rửa bằng etanol 70% trước khi lau bằng giấy giúp làm sạch và tăng tốc độ khô. Thêm các mẫu acrylamide lần lượt: BIS, nước, dung dịch đệm, amoni persulfat, TEMED. Lắc đều và đổ ngay.
Không cần phải khử khí polyacrylamide trước khi trùng hợp. (Acrylamide thường được đặt trong chân không để loại bỏ bọt khí vì oxy ức chế quá trình trùng hợp.)
Đầu mẫu keo dán ngang.
· Đặt một tờ giấy đen vào hộp dưới cùng, nền đen để tạo một số lỗ mẫu để nhìn rõ hơn.
· Bình chứa keo chứa đầy dung dịch đệm, phủ vừa đủ lên lớp keo.
· Nếu mép có đèn, bật đèn, để ánh sáng chiếu vào keo. Hút mẫu vào pipet.
· sử dụng thiết bị hút tự động.
· trong 10-200 mu 1 điểm di chuyển chất lỏng có thể được sử dụng ở hầu hết các điểm trên mẫu. Đối với các lỗ mẫu rất nhỏ (nhỏ hơn 10μ1), đầu pipet dài dùng để sắp xếp keo thuận tiện hơn.
· hút bằng pipet chỉ nhúng vào mẫu, hít vào chất lỏng chuyển động chậm. Mẫu có thể dính glycerin và việc bơm nhanh có thể kéo bọt khí vào đầu pipet.
· mẫu sau khi hút đầu hút, sẽ di chuyển đầu chất lỏng nhẹ nhàng trên mép ống hoặc giấy lau hút đầu chất lỏng ra ngoài các giọt. Cẩn thận không hút mẫu.
Đặt mẫu vào lỗ mẫu
· Thiết bị hút để giữ một áp suất nhỏ, làm cho mẫu dịch chuyển nhẹ đầu chất lỏng tràn.
· Đầu hút được đưa vào đệm, cao hơn một chút so với lỗ điểm, duy trì áp suất dương. Đầu hút có thể được đưa vào lỗ nhỏ.
· từ từ và đều đặn lấy mẫu ra. Đầu pipet được đặt phía trên lỗ mẫu điểm và mẫu sẽ chìm vào lỗ. Để mẫu chìm xuống để lấp đầy lỗ mẫu thay vì đẩy vào.
· Khi giọt mẫu cuối cùng có đầu chất lỏng, chất lỏng sẽ di chuyển đến chân thứ hai, từ từ nâng chất lỏng di chuyển, di chuyển ra khỏi đệm
Làm thế nào để lấy mẫu keo theo chiều dọc?
· lỗ mẫu keo dán thẳng đứng được tạo thành giữa hai mảnh thủy tinh. Trong keo rất mỏng, đầu pipet thậm chí không thể được chèn vào giữa hai tấm thủy tinh. Hãy chú ý đến glycerin! Đặt đầu pipet lên lỗ mẫu và mẫu sẽ chìm vào lỗ.
· mẫu điểm trước, hãy chắc chắn để đặt điểm thẳng đứng của lỗ mẫu gel polypropylene acyl được rửa sạch. Rửa sạch acrylamide chưa trùng hợp và nước có thể xuất hiện ở dưới cùng của lỗ mẫu. Nước có thể làm cho lỗ mẫu nhỏ hơn đáng kể. Sử dụng ống tiêm 25ml hoặc 50ml và kim 18-gauge. Đổ đệm điện di vào và cẩn thận rửa sạch lỗ mẫu.
· có thể khó nhìn thấy lỗ mẫu, nhưng đồng thời, phần còn lại thì dễ. Nếu có lỗ thừa, có thể thử đệm mẫu bằng bromophenol blue.
Thời gian đăng: 31-03-2023