Thận trọng đối với điện di gel polyacrylamide

· polyacrylamideGel phải bằng monome acrylamide, vật liệu bắt đầu trùng hợp, chất xúc tác và bên phải của hỗn hợp muối và đệm với nhau.

· Acrylamidevà bis (N, N '- methylen kép acrylamide) là ma trận gel dạng monome.

· Ammonium Persulfate bắt đầu quá trình trùng hợp kết dính. Việc xây dựng keo cần 10% dung dịch amoni persulfate được điều chế trong nước. Hầu hết các thông tin cho thấy nhu cầu sử dụng tích cực. Tuy nhiên, giải pháp 10% có thể được đặt ở 4 ℃ trong vài tuần mà không mất hoạt động đáng kể. Tạo ra tối đa 10 ml và loại bỏ khi keo không tổng hợp.

Mẹo: Tỷ lệ phần trăm củaAcrylamideTrong keo giải trình tự và keo protein không giống nhau. Nếu sử dụng giải pháp Acrylamide Premade: BIS, hãy đảm bảo có được chai phù hợp.

· Temed (n, n, n ', n'- tetramethyl ethylenediamine) là một chất xúc tác, trong một chai màu nâu, được đặt trong tủ lạnh. Thêm ngay trước khi đổ keo.

· Điện di polyacrylamide đã sử dụng thủy tinh trong điện di nên được rửa trước và sau mỗi lần. Sau khi điện di, rửa bằng bàn chải mềm và vải trong nước xà phòng nóng, rửa sạch bằng nước cất và đứng để khô.

· Độ ẩm và bụi có thể gây ra với polymer rỗng. Trước khi điện di, làm sạch tấm kính bằng cách làm sạch bằng kính và lau bằng bàn chải mềm. Rửa bằng nước cất và khô kỹ bằng lau giấy. Rửa sạch 70% ethanol trước khi lau bằng giấy giúp làm sạch và tăng tốc độ khô. Thêm các mẫu acrylamide liên tiếp: bis, nước, dung dịch đệm, amoni persulfate, Temed. Lắc tốt và đổ ngay lập tức.

Không cần thiết phải khử polyacrylamide trước khi trùng hợp. (Acrylamide từng được đặt trong chân không để loại bỏ bong bóng vì oxy ức chế trùng hợp.)

Mẹo mẫu điểm keo ngang.

· Đặt một mảnh giấy đen vào hộp dưới cùng, nền đen để làm cho một số lỗ mẫu để nhìn rõ hơn.
· Bộ đệm chứa đầy chất keo, chỉ trên chất keo.
· Nếu cạnh có ánh sáng, bật đèn, để ánh sáng chiếu sáng. Vẽ mẫu vào pipet.
· Sử dụng thiết bị pipeting tự động.
· Trong 10-200 mu 1, điểm di chuyển chất lỏng có thể được sử dụng trong hầu hết các điểm trên mẫu. Đối với các lỗ mẫu rất nhỏ (dưới 10μ1), đầu pipet dài được sử dụng để giải trình tự keo thuận tiện hơn.

· Nhúng chỉ ngâm trong mẫu, hít phải chất lỏng di chuyển chậm. Mẫu có thể xuất hiện dính với glycerin, và bơm nhanh có thể thu hút bọt khí vào đầu pipet.

· Các mẫu sau khi hít đầu ống, sẽ nhẹ nhàng di chuyển đầu chất lỏng ở mép ống hoặc lau giấy hút đầu chất lỏng bên ngoài các giọt nước. Hãy cẩn thận để không hút mẫu.

Đặt mẫu vào lỗ mẫu

· Thiết bị ống để giữ một chút áp lực, làm cho các mẫu hơi di chuyển đầu lỏng tràn.
· Đầu ống được chèn vào bộ đệm, cao hơn một chút so với các lỗ tại chỗ, duy trì áp suất dương. Đầu của pipet có thể được chèn vào một lỗ nhỏ.
· Từ từ và đều đặn các mẫu ra. Đầu pipet được đặt phía trên lỗ mẫu điểm và mẫu sẽ chìm vào lỗ. Để mẫu chìm để lấp đầy lỗ mẫu thay vì đẩy vào.
· Một khi giọt mẫu cuối cùng có đầu lỏng, chất lỏng sẽ chuyển sang chặng thứ hai, từ từ nâng di chuyển chất lỏng, di chuyển ra khỏi bộ đệm

Làm thế nào để làm mẫu keo dọc?

· Các lỗ mẫu keo dọc được hình thành giữa hai mảnh thủy tinh. Trong keo rất mỏng, đầu pipet thậm chí không thể được chèn giữa hai tấm kính. Xem glycerin! Đặt đầu pipet trên lỗ mẫu và mẫu sẽ chìm vào lỗ.
· Mẫu điểm trước, hãy chắc chắn đặt điểm thẳng đứng của lỗ gel gel polypropylen được rửa sạch. Rửa sạch acrylamide không được hội tụ và nước có thể xuất hiện ở dưới cùng của lỗ mẫu. Nước có thể làm cho lỗ mẫu nhỏ hơn đáng kể. Sử dụng ống tiêm 25ml hoặc 50ml và kim 18 mét. Đổ trong bộ đệm điện di và cẩn thận xả lỗ mẫu.
· Có thể khó nhìn thấy lỗ mẫu, nhưng cũng vậy, phần còn lại là dễ dàng. Nếu có các lỗ dư thừa, bộ đệm mẫu có thể được kiểm tra với màu xanh bromophenol.